Fonctionnement de la Synthèse de Peptides sur Mesure
La synthèse de peptides sur mesure consiste à construire une chaîne peptidique un acide aminé à la fois, en suivant la séquence exacte fournie par un client. Les deux principales voies industrielles sont la synthèse de peptides en phase solide (SPPS) et la synthèse de peptides en phase liquide (LPPS). Aujourd'hui, la plupart des commandes sur mesure sont exécutées sur SPPS car c'est rapide, programmable sur des synthétiseurs automatisés et facile à purifier entre les étapes.
Le Cycle SPPS, Étape par Étape
En SPPS, le premier acide aminé est ancré à une bille de résine insoluble, et la chaîne croît de l'extrémité C-terminale vers l'extrémité N-terminale par des cycles répétés de déprotection et de couplage.
- Chargement de la résine — l'acide aminé C-terminal est fixé à un support de résine solide ; le choix de la résine dépend du fait qu'un acide ou une amide C-terminal soit nécessaire.
- Déprotection — le groupe protecteur temporaire (généralement Fmoc) sur le groupe alpha-amino est retiré avec une base, exposant une amine libre pour le prochain couplage.
- Couplage — le prochain acide aminé protégé est activé et lié à la chaîne liée à la résine, formant une nouvelle liaison peptidique. Un excès de réactif pousse le couplage presque jusqu'à son terme.
- Lavage — la résine est rincée au solvant pour éliminer l'excès de réactifs et les sous-produits. La simple filtration nettoie la chaîne à chaque cycle, ce qui est le principal avantage de la SPPS.
- Répétition — les étapes de déprotection, de couplage et de lavage sont répétées pour chaque résidu jusqu'à ce que la séquence complète soit assemblée.
- Clivage et déprotection globale — le peptide terminé est coupé de la résine et tous les groupes protecteurs de la chaîne latérale se détachent, généralement avec un cocktail de TFA.
- Purification et QC — le peptide brut est purifié par HPLC en phase inverse et confirmé par spectrométrie de masse pour son identité et sa pureté.
Chimie Fmoc vs Boc
La SPPS utilise l'une des deux stratégies de groupe protecteur : Fmoc/tBu ou Boc/Bzl. La chimie Fmoc est la norme actuelle pour la plupart des travaux sur mesure car elle fonctionne dans des conditions plus douces : le groupe Fmoc se détache avec une base telle que la pipéridine, et le clivage final utilise le TFA plutôt que le HF dangereux requis par Boc/Bzl. Nous utilisons la SPPS basée sur Fmoc par défaut pour la majorité des commandes sur mesure, et passons au LPPS ou aux voies hybrides lorsque la séquence l'exige.
Qu'est-ce qui rend une séquence difficile à construire
Quelques caractéristiques prédisent des problèmes avant même le début de la synthèse. Les longues séquences hydrophobes font que la chaîne en croissance se replie et s'agglutine sur la résine, ce qui bloque le couplage. Les séquences au-delà d'environ 50 résidus perdent en rendement car les petites pertes à chaque étape s'additionnent. Les multiples cystéines nécessitent une formation de disulfure régiosélective contrôlée afin que les bons ponts s'associent. Les motifs tels que Asp-Gly sont sujets à des réactions secondaires d'aspartimide. Nous dépistons ces schémas en amont et ajustons la voie, les réactifs de couplage ou le système de groupe protecteur pour maintenir une pureté élevée.
Choisir la Bonne Pureté
Faites correspondre le grade à l'expérience. Les peptides bruts et de pureté supérieure à 75 % conviennent au criblage précoce, aux tests ELISA et à l'immunisation. Plus de 90 % à 95 % couvre la plupart des dosages quantitatifs et des travaux de structure-fonction. Plus de 95 % à 98 % est le bon choix pour les tests cellulaires, les études in vivo, la SAR et tout développement pharmaceutique, où une séquence de délétion parasite peut fausser le résultat. Si vous n'êtes pas sûr, envoyez l'application avec la séquence et nous vous recommanderons un grade.
Tous les peptides sont fournis pour la recherche, l'analyse et le développement pharmaceutique.
