製薬QCにおけるペプチド不純物と参照標準物質

不純物の管理は、ペプチド医薬品の製造においてより困難な部分の一つです。その理由は単純で、不純物がペプチド自体とほぼ同じように見えるためです。1つの残基の欠落、立体中心の反転、またはジスルフィド結合のスクランブルにより、メインピークのすぐ隣に位置し、非常によく似た挙動を示す分子が生成されます。これらを管理下に置くには、ペプチド特有の分析法と十分に特性評価された参照標準物質が必要です。このガイドでは、ペプチド不純物の主な種類、それらの管理方法、規制当局の期待事項、およびCMC、QC、分析チームにとって参照標準物質がどこに適合するかについて解説します。

ペプチド不純物が異なる理由

ほとんどの化学者が知っている不純物の限度値は、低分子向けに作成された ICH Q3A に由来します。ペプチド不純物は大きく、有効成分と密接に関連しており、多くの場合、互いにほぼ同一であるため、これらの閾値はペプチドにそのまま拡張することはできません。特にジアステレオマーは分離が難しく、通常は合成された標準物質をサンプルにスパイク（添加）することで確認されます。したがって、ペプチドの不純物管理は、一般的な割合のカットオフではなく、クラス特有の分析法と特性評価された標準物質に依存しています。

ペプチド不純物の2つのファミリー

ペプチド不純物は2つのグループに分類されます。合成中に生成されるものと、後でペプチドが分解するにつれて形成されるものです。

どの不純物が支配的になるかは配列に依存します。メチオニンまたはシステインを含むペプチドは酸化しやすい傾向があります。アスパラギンとグルタミンは脱アミド化を招きやすく、Asp を含む配列はアスパルチミドを形成する可能性があります。カルシトニン、バソプレシン、アトシバン、プレカナチドなどのジスルフィド結合を持つペプチドは、その結合がスクランブルまたは還元され、ジスルフィド異性体や還元型または二量体型を生じる可能性があります。配列を読み解くことで、どの類縁物質を予測し、その周囲に分析法を設計すべきかがわかります。

ペプチド不純物の管理方法

管理はプロセスから始まり、分析によって検証されます。プロセス側では、カップリング効率、切断条件、および濃縮ペプチド溶液の取り扱いを最適化して、不純物を抑えます。分析側では、主役となるのは高分解能質量分析と組み合わせた逆相HPLCまたはUHPLCであり、親ペプチドとの質量の違いによって各不純物を特定します。ジアステレオマーおよび共溶出種は、参照標準物質をスパイクすることで確認されます。配列に従って実行される強制分解試験により、酸化、脱アミド化、加水分解、およびジスルフィドの変化を捉えることができる安定性指示試験法が確立されます。単一の分離では不十分な場合は、直交法が使用されます。

規制当局の期待事項

ペプチドの不純物管理は、現在独自の規制上の形を持っています。ICH Q6A などの一般的な枠組みが適用され、EMAは、不純物プロファイリングと管理の期待事項を定めた合成ペプチドの開発と製造に関するドラフトガイドラインを発行しています。米国では、組換えオリジネーターを参照する高度に精製された合成ペプチドの略式申請に関する FDA の 2021 年のガイダンスが重要な文書です。これには、グルカゴン、リラグルチド、ネシリチド、テリパラチド、テデュグルチドなどのペプチドが名指しされており、開発者に対して、指定された各ペプチド関連不純物を特定し、正当化することを求めています。

その正当化の大きな部分は免疫原性です。残基が追加、欠失、または修飾された不純物は、有効成分には存在しない新しい配列を導入する可能性があり、それにより新しいT細胞エピトープを作成し、原則として免疫応答を引き起こす可能性があるためです。したがって、規制当局は開発者に対し、これらの不純物を特性評価し、多くの場合インシリコ（in silico）およびインビトロ（in vitro）のツールを使用してそのリスクを評価し、不純物を正当化された制限内に保つことを期待しています。これは規制環境の背景として提供されるものであり、規制または法的アドバイスではありません。

参照標準物質の役割

参照標準物質は、ペプチド不純物の管理を測定可能にするものです。同一性を確認して分析を較正するための親ペプチドの十分に特性評価された標準物質と、類縁物質を直接扱うための指定された不純物の標準物質が必要です。不純物標準物質を使用すると、HPLC スパイクによって類縁物質のピークを見つけ、既知の材料に対してそれを定量し、分析法を検証し、システム適合性試験を実行できます。規制対象の作業では、提出書類でそのレベルを測定し正当化できるように、指定された各不純物には一般に独自の特性評価された標準物質が必要です。

ペプチド不純物管理に必要な参照標準物質は何ですか？

一般的なペプチドの場合、親ペプチドの参照標準物質と、その名前が付けられた不純物の標準物質の2つが必要です。親標準物質は、同一性と較正の基盤となります。特定の欠失配列、ジアステレオマー、酸化型、またはジスルフィド異性体などの不純物標準物質を使用すると、各類縁物質を割り当てて定量し、分析法の検証と安定性試験をサポートできます。重要なバッチの前にこのセットを早期に構築することで、チームは後で作業を繰り返すことなく、不純物と免疫原性の期待に応えることができます。

SynPeptideはペプチド不純物の作業をどのようにサポートするか

SynPeptide (Nanjing SynPeptide Biological Technology) は2013年からペプチドを製造しており、分析開発および品質管理で使用される参照標準物質および類縁物質ペプチドを供給しています。不純物の作業において有用なポイントは以下の通りです：

• サケカルシトニン、バソプレシンアナログ、ランレオチド、アトシバン、プレカナチド、テリパラチドなどの分子の親ペプチドおよび類縁物質を含む、医薬用ペプチド不純物および参照標準ペプチドのラインナップ。
• カスタムペプチド合成およびペプチド修飾を通じた、欠失および切断配列、ジアステレオマー、酸化型、ジスルフィド異性体を含む、特定の指定された不純物の受注合成。
• HPLCおよび高分解能質量分析による特性評価、全バッチにおける分析証明書（COA）およびアイデンティティデータの提供。
• 比較、スパイク、および分析法開発の作業をサポートする、カタログペプチドおよび活性ペプチドの幅広いカタログ。

これらのペプチドは、研究、分析、および製造用の参照材料として提供されます。これらは最終的な医薬品ではなく、人体への使用を目的としておらず、医薬品の規制上の責任は開発者に留まります。

ペプチドチームにお問い合わせください

分析法のための親参照標準物質または特定の指定不純物が必要ですか？ 配列または構造、必要な不純物、純度、数量をお知らせいただければ、仕様と見積もりを返信いたします。peptide@synpeptide.com までチームにご連絡ください。

よくある質問 (FAQ)

ペプチド不純物とは何ですか？

ペプチド不純物は、ターゲットペプチドと一緒に現れる不要な分子です。これらは2つのグループに分類されます。合成中に生成される欠失、挿入、ジアステレオマー配列などのプロセス関連の不純物と、後で形成される脱アミド化、酸化、ジスルフィドスクランブル型などの分解不純物です。これらはメインのペプチドに非常に近いため、分離して測定するための専用の分析法が必要です。

なぜペプチドには特別な不純物管理が必要なのですか？

ICH Q3Aの低分子の限度値は、不純物が大きく、構造的に有効成分および互いに類似しているペプチドには適用されません。代わりに、管理はペプチド特有の分析法、特性評価された参照標準物質、および一部の不純物については免疫原性リスクの評価に依存しています。

ペプチド不純物参照標準物質とは何ですか？

これは、欠失配列や酸化型など、原薬中のその不純物を同定し定量するために使用される、特定の不純物の十分に特性評価されたサンプルです。アナリストはこれをサンプルにスパイクして一致するピークを見つけ、それに対して不純物を測定し、分析法の検証やシステム適合性試験で使用します。FDAの合成ペプチドガイダンスの対象となるペプチドはどれですか？

FDA の 2021 年のガイダンスは、組換え由来製品のジェネリックとして提出された高度に精製された合成ペプチドを対象としており、グルカゴン、リラグルチド、ネシリチド、テリパラチド、テデュグルチドを挙げています。これらについて、開発者は指定された各ペプチド関連不純物を特定し、その免疫原性リスクを含めて正当化することが期待されています。SynPeptideは特定の指定された不純物を作成できますか？

はい。親参照標準物質に加えて、定義された欠失配列、ジアステレオマー、酸化バリアント、またはジスルフィド異性体などの特定の不純物を受注合成し、分析証明書とともにHPLCおよび質量分析によって特性評価します。配列と不純物をお知らせいただければ、対応範囲を検討いたします。

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  Synpeptide

  ペプチド専門CRO/CDMO企業

  SynPeptide研究チームには、ペプチド合成、精製、分析評価を専門とする研究者が集結しています。受託合成品・定番ラインナップペプチドの実験現場で培った知見をもとに、研究者、製剤開発担当者、製品開発者向けに根拠に基づいた情報を発信しています。掲載内容は最新の学術文献と社内品質管理データに基づき検証を実施しており、正確性・再現性を重視し、ペプチド科学に関する情報を適切に発信するというSynPeptideの理念を体現しています。