カスタムペプチド合成の仕組み
カスタムペプチド合成とは、お客様が提供する正確な配列に従って、一度に1つのアミノ酸ずつペプチド鎖を構築することを意味します。主要な2つの工業的経路は、固相ペプチド合成 (SPPS) と液相ペプチド合成 (LPPS) です。今日のカスタム注文のほとんどは SPPS で実行されます。これは、高速であり、自動合成装置でスクリプト化でき、ステップ間の精製が容易であるためです。
SPPS サイクル、ステップバイステップ
SPPS では、最初のアミノ酸が不溶性樹脂ビーズに固定され、脱保護とカップリングのサイクルを繰り返すことで、C末端からN末端に向かって鎖が成長します。
- 樹脂へのローディング — C末端アミノ酸が固体樹脂サポートに結合されます。樹脂の選択は、C末端に酸が必要かアミドが必要かによって異なります。
- 脱保護 — アルファアミノ基の一時的な保護基（通常は Fmoc）が塩基で除去され、次のカップリングのために遊離アミンが露出します。
- カップリング — 次の保護されたアミノ酸が活性化され、樹脂に結合した鎖に結合して、新しいペプチド結合を形成します。過剰な試薬により、カップリングが完了に近づきます。
- 洗浄 — 樹脂を溶媒ですすぎ、過剰な試薬や副生成物を取り除きます。ろ過だけで各サイクルで鎖をきれいにできることが、SPPS の中核的な利点です。
- 繰り返し — 完全な配列がアセンブルされるまで、各残基に対して脱保護、カップリング、洗浄のステップが再度実行されます。
- 切断と完全な脱保護 — 完成したペプチドが樹脂から切り離され、通常は TFA カクテルを使用して、すべての側鎖保護基が外れます。
- 精製と QC — 粗ペプチドは逆相 HPLC によって精製され、質量分析によって同一性と純度が確認されます。
Fmoc と Boc 化学の比較
SPPS は、Fmoc/tBu または Boc/Bzl のいずれかの保護基戦略を使用します。Fmoc 化学はより穏やかな条件下で実行されるため、現在のほとんどのカスタム作業の標準となっています。Fmoc 基はピペリジンなどの塩基で脱落し、最終切断には Boc/Bzl が必要とする危険な HF（フッ化水素）ではなく TFA を使用します。当社では大部分のカスタム注文において Fmoc ベースの SPPS をデフォルトとして使用し、配列の必要性に応じて LPPS またはハイブリッドルートに切り替えます。
配列の構築を困難にする要因
合成が始まる前にトラブルを予測できる特徴がいくつかあります。長い疎水性の連なりは、成長する鎖を樹脂上で折りたたんだり凝集させたりして、カップリングを停滞させます。およそ50残基を超える配列では、ステップごとの小さな損失が蓄積するため、収率が低下します。複数のシステインでは、正しい架橋がペアになるように、制御された位置選択的なジスルフィド形成が必要です。Asp-Gly のようなモチーフは、アスパルチミド副反応を起こしやすい傾向があります。私たちはこれらのパターンを事前にスクリーニングし、ルート、カップリング試薬、または保護基スキームを調整して高純度を維持します。
適切な純度の選択
実験に合わせてグレードを一致させます。粗製および75%以上の純度のペプチドは、初期スクリーニング、ELISA、免疫化に適しています。90%〜95%以上の純度は、ほとんどの定量アッセイと構造機能研究をカバーします。95%〜98%以上の純度は、細胞ベースのアッセイ、インビボ研究、SAR、および配列の欠失が結果を歪める可能性のある医薬品開発に最適な選択肢です。不明な点がある場合は、配列と一緒にアプリケーションの目的を送信していただければ、適切なグレードを推奨いたします。
すべてのペプチドは、研究、分析、および医薬品開発用として提供されます。
